CUERPOS DE BARR

 

Objetivos.

 

a)     Conocer el proceso de diferenciación sexual.

b)     Observar la evidencia citológica del cromosoma X inactivo.

c)      0 Analizar el proceso de inactivación del cromosoma X.

 

Introducción.

 

En 1923, Painter demostró ciotológicamente la existencia de los cromosomas X y Y en el humano. En 1949, Barr y Bertram descubrieron masas de cromatina sexual (cuerpos de Barr) en células en interfase femeninas y no en masculinas. A esta observación siguió el desarrollo de una técnica sencilla que permitía detectar cuerpos de Barr en células de mucosa oral. Como resultado de su aplicación se reconoció que las células femeninas eran “cromatina positiva” mientras que las masculinas eran “cromatina negativa”, pero que existían excepciones: las pacientes con síndrome de Turner no tenían cuerpos de Barr y los pacientes con síndrome de Klinefelter si los presentaban. El análisis citogenético de estos pacientes explicó la discrepancia aparente al demostrarse que el síndrome de Turner tenía un complemento cromosómico 45,X y el de Klinefelter 47,XXY. Estos hallazgos también demostraron que en presencia de un cromosoma Y, independientemente del número de cromosomas X, el embrión humano se desarrolla como macho, mientras que en ausencia del Y se desarrolla como hembra.

El siguiente paso en el entendimiento de los cromosomas sexuales humanos fue la explicación de la cromatina sexual en términos de la inactivación del cromosoma X. La hipótesis de Lyon establece que en las células somáticas de mujeres normales, y no en las de hombres normales, un cromosoma X es inactivado al azar para compensar la dosis génica en ambos sexos. El cuerpo de Barr representa al cromosoma X inactivo de replicación tardía. En pacientes con cromosomas X supernumerarios, todos los cromosomas en exceso de uno son inactivados y forman cuerpos de Barr (por ejemplo un paciente Klinefelter 47,XXY tiene 1 cuerpo de Barr y una mujer 47,XXX tiene 2 cuerpos de Barr).

La diferenciación sexual es un proceso dinámico sujeto a un programa secuencial, ordenado e interrelacionado que se lleva a cabo en varias etapas consecutivas: el establecimiento del sexo cromosómico durante la fertilización, la etapa pregonadal, el desarrollo del sexo gónada, y la definición de los genitales internos y externos, que condicionan el sexo fenotípo.

Los individuos con reversión sexual (varones XX, mujeres XY y hermafroditas verdaderos XX) aparentemente rompen la regla de que el cromosoma Y controla la diferenciación testicular. En el caso de los varones XX, se ha demostrado que el 80% presenta secuencias derivadas del cromosoma Y translocadas al cromosoma X por una recombinación ilegítima durante la meiosis paterna.

 

El análisis molecular de los diferentes fragmentos del cromosoma Y presentes en estos pacientes permitió definir que la región terminal del brazo corto era esencial en la diferenciación testicular y postular la existencia de un gen cuya presencia o ausencia determina el destino de la gónada bipotencial en testículo u ovario. En el ser humano este gen se denominó TDF. (por sus siglas en inglés “testis determining factor”). En 1987, Page y cols. clonaron una región de 140 kb en Yp presente en un varón XX y ausente en una mujer XY dentro de la cual identificaron un gen que llamaron ZFY. (“zinc-finger protein”) y que propusieron como TDF. Sin embargo, en los años subsecuentes se acumularon una serie de observaciones que excluyeron a ZFY. como TDF. La nueva búsqueda de TDF. se limitó a una región de 35 kb, presente entre el límite de la región pseudoautosómica y el punto de ruptura en varones XX, ZFY. negativos, resultando en la clonación del gen SRY. (“sex-determining región, Y-chromosome”) por Sinclair y cols. en 1990. Las evidencias posteriores apoyan a SRY. como TDF.

 

Material biológico:

 

Desarrollo de la práctica:

 

1. Enjuagarse la boca repetidas veces con agua y raspar la mucosa interna de la mejilla con un abatelenguas. Eliminar el primer raspado con un algodón y repetir la operación.

 

2. Hacer un frotis del segundo raspado sobre un portaobjetos. Añadir una o dos gotas de la solución de aceto-orceína. Colocar un cubreobjetos. Eliminar el exceso de colorante.

 

3. Observar a seco débil hasta encontrar un campo en donde se localicen células. Observar después a inmersión para identificar el corpúsculo de Barr el cual se aprecia como una mancha obscura adherida a la membrana nuclear y que no desaparece al mover el tornillo micrométrico del microscopio.

 

NOTA: EN MUJERES NORMALES EL NÚMERO PROMEDIO DE CÉLULAS EN FROTIS BUCALES CON CUERPO DE BARR ES DE 18-60% .

 

 

BIBLIOGRAFÍA.:

 

- Gustafson ML, Donahoe PK. (1994). Male sex determination: current concepts of male sexual differentiation. Annu Rev Med; 45: 505-524.

- Grumbach MM, Conte FA. (1992). Disorders of sex differentiation. In “Williams Textbook of Endocrinology”. J.D. Wilson and D.W. Foster, eds. Saunders. Philadelphia. 853-951 pp.

- López-López M, Cervantes-Peredo A, Kofman-Alfaro S. (1996). Avances en el conocimiento del proceso genético en la diferenciación sexual del humano. Rev Inv. Clin; 48: 129-137.

- Schafer AJ (1995). Sex determination and its pathology in man. Advances in Genetics; 33: 275-329.

- Thompson MW, McInnes RR, Willard HF. (1991).Genetics in Medicine. 5th ed. W.B. Saunders Company. USA. 500 p.

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